研究与指南

如何重构肽：计算器分步指南

15 2 月, 2026

如何正确重构肽 是任何临床前肽工作流程中的第一个质量控制检查点。算术很简单，但此步骤中的小偏差会传播到每个下游测量。本指南引导实验室研究人员完成冻干研究肽的六步重构方案，并将其与免费的 CertaPeptides 重构计算器，并提供了典型的参考表 抑菌水 八种常见研究肽的卷。这里描述的所有程序都是 仅供研究用途.

长话短说： 使用抑菌水（0.9%苯甲醇），切勿使用无菌盐水。用公式计算水的体积 peptide amount (mg) / target concentration (mg/ml)。将溶剂沿着小瓶壁缓慢注入。旋转，不要涡旋。立即贴上标签。工作库存储存在 2 至 8 摄氏度（最多 28 天）或等分并冷冻在 -20 摄氏度以供存档。仅限临床前、体外和动物模型使用。

导致临床前研究数据无效的常见重构错误包括使用无菌水而不是抑菌水（首次穿刺后 24 小时内出现微生物污染）、涡旋混合（会引入气泡并通过剪切应力使肽键变性）以及使用标签量而不检查小瓶批次报告中的肽含量。该协议系统地解决了这些问题，适用于体外测定和动物模型研究工作流程。

你需要什么

开始之前，请在您的工作站收集所有材料。将一切都放在触手可及的地方，可以最大限度地减少处理时间并降低手术过程中的污染风险。在干净的实验室环境中工作，最好靠近 HEPA 过滤的层流罩（如果您的设施有）。

• 冻干肽小瓶 – 从供应商处收到的密封无菌小瓶中的冻干冻干物。
• 抑菌水(BW) – 0.9% 苯甲醇的注射用水溶液。不是普通的无菌水，不是盐水。
• 精密注射器 – 1 ml 容量，配有 27 至 30 量规针，用于低死体积测量。胰岛素式注射器是研究工作流程中的标准配置。
• 酒精棉签 – 70% 异丙醇垫，用于橡胶隔垫消毒。
• 无菌储存瓶 – 如果将重构的溶液转移到等分试样中，则首选琥珀色玻璃进行避光。
• 永久性记号笔或标签带 – 用于在重构后立即标记肽名称、浓度和重构日期。
• 分析证书 (COA) – 在计算体积之前检查其报告的测量肽含量（如果报告为 1）。

逐步重构方案

步骤 1 – 计算您的目标浓度

在接触小瓶之前，先做一下数学计算。基本重构公式为 BW 体积 (ml) = 肽质量 (mg) / 目标浓度 (mg/ml)。 HPLC 纯度百分比不是校正因子：它是主峰占检测到的峰面积的份额，而不是小瓶质量的份额。如果您的小瓶批次报告注明每瓶的肽含量（以毫克为单位），请使用该数字作为肽含量，作为您小瓶的估计值。

工作过的例子。 一瓶 5 毫克 BPC-157，目标浓度1 mg/ml。所需体积 = 5 mg / 1 mg/ml = 5 ml 抑菌水。记录标签上的浓度；如果您的小瓶批次报告指出了不同的肽含量，请使用该数字进行计算。

与其每次都手动计算，不如使用下面的计算器。输入小瓶中的肽含量（小瓶批次报告中注明每瓶的含量以毫克为单位，该数字是估计值）、您添加的抑菌水的体积以及每次抽取所需的量；它给出了浓度、抽取体积以及每瓶的抽取次数。将其添加为书签——它消除了重复实验中协议漂移的主要来源。

免费工具：
打开 CertaPeptides 重构计算器
瓶量、水量和每次吸入量；浓度、抽取体积以及每瓶的抽取量。临床前研究参考。

步骤 2 – 准备工作区域

使用新鲜的 70% 异丙醇棉签彻底擦拭工作表面。在将任何材料放置在表面上之前，使其完全干燥（大约 60 秒）。接触肽或溶剂的残留酒精会降解化合物，并在您的研究中引入不受控制的变量。

如果在共用实验室工作，材料下的干净纸巾或无菌布可以提供额外的污染屏障。洗手，如果可以的话，戴上丁腈手套。目标是尽量减少针插入过程中小瓶隔垫暴露在露天的时间。层流是理想的选择，但对于小规模的研究重建来说不是强制性的。

步骤 3 – 抽取抑菌水

用新鲜的酒精垫擦拭抑菌水瓶的橡胶隔膜。等待 30 至 60 秒，让酒精蒸发。将注射器针头以微小角度插入隔膜中心，这样可以减少橡胶的核化。倒置 BW 瓶，将柱塞缓慢拉回至计算出的体积，然后抽出针头。检查注射器针筒是否有气泡；如果存在，请轻轻弹动并将气泡推出，然后再继续。

使用您在步骤 1 中计算的体积：如果是 2.0 毫升，则抽取 2.0 毫升。如果您的注射器仅容纳 1 毫升，请分成两次抽取 - 这优于会引入更多死体积误差的较大规格注射器。测量方法的一致性在实验批次中很重要，因此请在实验方案注释中记录您使用的注射器类型。

步骤 4 – 沿瓶壁缓慢引入溶剂

用新鲜的酒精棉签擦拭冻干肽小瓶的橡胶隔膜并使其干燥。将针慢慢插入隔膜并调整针尖角度，使其指向内玻璃壁，而不是直接向下插入肽饼。非常缓慢地按下柱塞，让抑菌水沿着小瓶壁流下，并从下向上逐渐接触冻干物。

不要将液流引导到肽饼上。 高速液体冲击可以使冻干结构破碎并产生泡沫。泡沫表示空气-水界面与肽接触，这会加速氧化并使脆弱残基变性，特别是在含有蛋氨酸、半胱氨酸或色氨酸的肽中（Manning 等人，Pharm Res 2010， PMID 20143256）。壁定向缓慢注射技术需要额外的 20 到 30 秒，但有意义地保留了肽的完整性。一旦所有 BW 都进入，取出针头并将注射器丢弃在锐器容器中。

步骤 5 – 轻轻旋转直至澄清

不要涡旋。不要摇晃。 将小瓶放在手掌之间，缓慢地来回滚动，或轻轻地以小圈方式旋转。冻干物将开始水合并溶解。大多数肽在 2 至 5 分钟的温和搅拌内完全澄清。一些两亲性或长链肽（例如 44 氨基酸处的 TB-500）可能会呈现轻微乳白色 - 这对于该类肽来说是正常现象，本身并不表示降解。

如果轻柔滚动 10 分钟后肽尚未溶解，请勿用力。将其在室温下再放置 10 至 15 分钟。不建议通过加热来加速溶解——即使体温升高也足以加速敏感肽的降解（Wang，Int J Pharm 1999， PMID 10460913）。如果 30 分钟后仍有可见沉淀物，请检查供应商是否为该特定化合物提供溶剂指南，以及您使用的溶剂是否与其匹配。

步骤 6 – 立即贴标签并储存

完全溶解后，在做任何其他事情之前给小瓶贴上标签。写下或粘贴：肽名称、浓度 (mg/ml)、重构日期和计算的有效期（当使用抑菌水储存在 2 至 8 摄氏度时，通常为重构日期起 4 周）。几分钟内放入冰箱 - 重构后请勿置于室温下。从此时起，冷链处理是多周稳定性的最大决定因素。

如果您要等分到单独的存储瓶中以进行长期存档，请立即使用新的注射器和无菌技术进行转移。每个等分瓶都有相同的标签。快速转移以尽量减少累积的空气暴露。对于超过 4 周的储存，请将一次性等分试样冷冻在 -18 至 -20 摄氏度（请参阅下面的储存部分）。有关长期储存条件的综合指南，请参阅 肽储存指南.

重构体积参考表

下表提供了常见小瓶尺寸中八种肽的典型抑菌水体积。这些是基于典型临床前研究浓度范围的起点参考——使用 CertaPeptides 重构计算器 计算出适合您的小瓶量和您选择的水量的浓度和吸取量。所有数值仅供实验室研究参考。

仅供临床前研究参考。浓度选择取决于实验设计、测定灵敏度和存储体积限制。重构前请查阅您的具体研究方案。

为什么是抑菌水而不是无菌水

抑菌水 (BW) 和无菌注射水 (SWFI) 在生产时都是无菌的。不同之处在于小瓶首次被刺破后会发生什么。无菌水不含防腐剂——一旦隔膜被破坏，时钟就开始计时。任何通过针头或从周围空气引入的微生物都可以立即开始繁殖。对于一次使用整个小瓶的一次性应用，SWFI 在技术上是可以接受的。对于多用途研究瓶来说，这是不实用的。

抑菌水含有 0.9% 苯甲醇，这是一种广谱抑菌防腐剂，可通过膜破坏抑制细菌和真菌增殖（Manning 等人，Pharm Res 2010， PMID 20143256）。这将重构溶液的安全可用期延长至大约 在 2 至 8 摄氏度下储存时的 28 天，与 SWFI 的 24 小时或更短相比。由于大多数研究肽小瓶会在数天或数周内多次消耗，因此抑菌水是研究用重构的标准溶剂。有关溶剂选择标准、按肽类别划分的溶解度和保质期数据的完整详细信息，请参阅完整的 抑菌导水器.

常见的重组错误

对这六个错误的系统认识将保护临床前数据的完整性并减少样品浪费：

• 涡旋或剧烈摇动。 产生泡沫，引入加速氧化的空气-水界面，并产生可断裂肽键的剪切应力。始终仅使用轻柔的旋转。
• 使用无菌水或盐水作为多用途小瓶。 无菌水没有抗菌保护；盐水 (0.9% NaCl) 会导致带电或两亲性肽沉淀或聚集。将抑菌水用于需要多次储存的研究肽。
• 直接注射到冻干饼上。 高冲击力的液体接触会破坏脆弱的多孔冻干物结构并促进发泡。始终将针头对准小瓶壁。
• 使用标签金额而不检查内容。 小瓶中的肽含量可能与其标签含量不同。如果您的小瓶批次报告注明了每瓶的肽含量（以毫克为单位），请在计算中使用该数字作为您小瓶的估计值（百分比仅给出测量的粉末总重量的质量）； HPLC 纯度数字是检测到的峰面积的一部分，而不是肽质量的校正。
• 复溶后室温保存。 重构的肽在环境温度下快速降解。大多数在 20 至 25 摄氏度的数小时内失去显着效力。在重构后几分钟内移至冰箱（2 至 8 摄氏度）。
• 冻融循环相同的等分试样。 反复冻融循环会导致冰晶损伤和渐进肽降解。如果需要长期储存，请在第一次冷冻前分成一次性等份。查看完整列表 肽重组错误 每个都有影响数据。

重构后储存

一旦重构，肽溶液就比其冻干前体更脆弱。导致降解的三个因素：温度、光照和污染（Wang，Int J Pharm 1999， PMID 10460913）。管理这三者可以延长可用的保质期，并保持多周实验方案的实验一致性。

温度。 对于带有抑菌水的活跃工作种群，储存在 2 至 8 摄氏度，最多 28 天。如需长期存档，请以一次性等份形式冷冻在 -18 至 -20 摄氏度下。请勿存放在无霜冰箱中（除霜周期期间的温度循环会降解肽）。冻融限度：一个周期。首次冷冻前预等分。

光。 紫外线辐射甚至长时间暴露在可见荧光下都会破坏肽键，特别是在含有芳香族残基的化合物（色氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸）中。储存在琥珀色玻璃瓶中或用铝箔包裹透明小瓶。切勿将肽溶液长时间放置在明亮实验室的工作台上。

污染。 每次插入针头前用酒精擦拭隔垫，即使小瓶已放在冰箱中。每次抽取时使用新的注射器。如果溶液出现明显的浑浊、颜色变化或重构时不存在的颗粒物质，则丢弃 - 请勿在实验中使用（Bogdanowich-Knipp 等人，肽溶剂稳定性审查， PMID 10424348）。有关涵盖所有肽类别的完整基于证据的存储协议，请参阅 肽储存指南.

常见问题解答

我用什么水来重构肽？

抑菌水 (BW) 是研究肽的标准。它含有 0.9% 苯甲醇作为防腐剂，可抑制微生物生长，并将重构溶液的保质期延长至大约 28 天（2 至 8 摄氏度）。无菌注射用水对于一次性应用是可接受的，但对于多用途小瓶不提供抗菌保护。请勿使用自来水、未经消毒的蒸馏水或普通盐水。

重组肽在冰箱中可以保存多长时间？

用抑菌水复溶并储存在 2 至 8 摄氏度下：对于大多数肽来说大约为 28 天。用无菌水复溶：最长 24 小时。以一次性等分试样形式冷冻在 -18 至 -20 摄氏度：大多数肽为 3 至 6 个月，但有些肽可稳定长达 12 个月。这些是一般实验室指南——稳定性因肽序列、浓度和储存条件而异。请务必注意标签上的重构日期。

我应该重新配制到什么浓度？

浓度完全取决于您的实验方案、测定的检测灵敏度以及每个研究应用的可用体积。浓度越高，每次使用所需的体积越小（在临床前工作中限制每个动物模型给药的体积时很有用），但会减少总样品体积。使用 CertaPeptides 重构计算器 根据您的样品瓶尺寸和研究要求对不同的浓度选项进行建模。上面的参考表列出了八种主要研究肽的常用起始浓度。

我可以使用普通盐水进行复溶吗？

一般不建议使用盐水（0.9% NaCl 溶液）进行肽重构。氯化钠可导致带电或两亲性肽沉淀或聚集。盐水对于多次使用的储存也不提供抗菌保护。虽然一些特定的肽方案引用等渗盐水用于特定应用，但抑菌水是研究肽重构的默认选择，因为它与最广泛的化合物相容且具有防腐特性。

我需要过滤重构的肽溶液吗？

如果在重构和储存期间遵循无菌技术，则大多数临床前研究应用不需要过滤。如果您的方案需要内毒素限制或无颗粒解决方案（例如，某些具有严格注射量控制的体内动物模型研究），通常使用 0.22 微米无菌 PES 或 PVDF 注射器过滤器。大多数肽应避免使用 PTFE 过滤器，因为非特异性结合会降低有效浓度。在过滤完整的库存之前，请务必使用较小的先导体积来验证过滤器的回收率。

以上所有内容仅供实验室研究之用。这些材料不用于人类消费、医疗诊断或治疗。研究人员应遵循其机构的生物安全和化合物处理标准操作程序。